高品质Laminin蛋白，支持临床级别iPSCs规模化生产

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以iPSCs为核心的再生医学具有极大的应用价值和发展潜力，iPSCs在心脏疾病、神经性疾病、眼科疾病、肿瘤领域、代谢疾病等多个领域的应用广受看好，尤其是工程化 iPSCs 来源的免疫细胞疗法正在成为肿瘤治疗热潮。然而，由于iPSCs敏感的多能干性状态和对支持基质物质的依赖，培养扩增足够的iPSCs应用于临床面临巨大的挑战。研究显示，扩增过程中影响iPSCs质量的一个关键初始步骤是使用特性良好的生物材料，其中发挥支撑作用的培养基质材料起着关键作用。

 iPSC的大规模生产：包括上游和下游阶段，BioDrugs. 2021 Nov;35(6):693-714.

在过去的十年中，基于特色培养基和支持基质的iPSCs培养策略得到了不错的发展，对于临床级生物样品用iPSCs规模化生产至关重要，支持基质被用作细胞粘附和增殖的支架，可在补加一定生长因子进一步增强细胞粘附和生长，其中，层粘连蛋白Laminin作为培养基质可很好的支持iPSCs或ESCs的粘附及非分化增殖，成为行业关注的焦点。有研究显示，在封闭的细胞扩增系统中扩增人类诱导多能干细胞时，在系统的中空纤维涂上Laminin-521，hiPSCs的增殖显著增加，他们表示Laminin-521能够覆盖所有中空纤维表面，为细胞附着提供更大的区域，从而能够最大限度地提高hiPSCs的扩增；也有科学家在重组粘连蛋白Laminin E8条件下，在三种自定义培养基上分别对三种hESC和两种hiPSC 成功进行了10代的维持培养，可保持多能性标志物的高水平表达(图2)，在30代后仍具有正常的核型，并且可以正常分化成三个胚层。

与基质胶相比，Laminin-E8可保持更高水平的iPSCs和hESCs多能性标志物表达。Nature communications vol. 3 (2012): 1236.,

实际上，层粘连蛋白Laminin可与细胞表面的多种受体结合，包括整合素、多聚糖等，Laminin蛋白与其受体结合，也决定了其支持细胞贴壁的能力。其中整合素α6β1在hESC和hiPSC中大量表达，Laminin-511、-332和-111等具有与整合素α6β1特异性高亲和力结合的特点，有研究显示，功能阻断性抗体阻断整合素α6β1与层粘连蛋白的结合后，可影响细胞的粘附效果，证明整合素α6β1是层粘连蛋白的主要细胞粘附受体。因此，层粘连蛋白Laminin和整合素α6β1高亲和力结合，直接决定Laminin对细胞贴壁能力的支持。

通过整合素α6β与层粘连蛋白的结合来介导细胞的粘附，Nature communications vol. 3 (2012): 1236.

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◆ 高亲和力经Integrin验证；

◆ 高干性维持能力经iPSCs培养验证

◆ 无菌、超低内毒<5 EU/mg；

Laminin 521 (LA5-H5261) could maintain the stemness of iPSC. Immunofluorescent staining indicated that the iPSCs expressed high levels of pluripotency associated markers Sox2, TRA-1-60, SSEA4 and OCT4.

Laminin 511（货号：LA8-H5283）

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★ 与Integrin的亲和力验证

Human Laminin 511 E8 Protein, Fc Tag, premium grade (Cat. No. LA8-H5283) captured on Protein A Chip can bind Human ITGA6&ITGB1 Heterodimer Protein, His Tag&Tag Free (Cat. No. IT1-H52W7) with an affinity constant of 7.82 nM as determined in SPR assay (Biacore 8K).

Loaded Human Laminin 521 E8 Protein, Fc Tag, premium grade (Cat. No.LA5-H5261) on Protein A Biosensor, can bind Human ITGA6&ITGB1 Heterodimer Protein, His Tag&Tag Free (Cat. No. IT1-H52W7) with an affinity constant of 41.9 nM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e).

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参考文献

1. Paccola Mesquita, Fernanda C et al. “Laminin as a Potent Substrate for Large-Scale Expansion of Human Induced Pluripotent Stem Cells in a Closed Cell Expansion System.” Stem cells international vol. 2019 9704945. 22 Jan. 2019,

2. Miyazaki T, Futaki S, Suemori H, et al. Laminin E8 fragments support efficient adhesion and expansion of dissociated human pluripotent stem cells [published correction appears in Nat Commun. 2013;4:1931]. Nat Commun.